C18液相色譜柱是基于溶質(zhì)、極性流動(dòng)相和非極性固定相表面間的疏水效應(yīng)建立的一種色譜模式，任何一種有機(jī)分子的結(jié)構(gòu)中都有非極性的疏水部分，這部分越大，一般保留值越高，在液相色譜中這是應(yīng)用面較廣的一種分離模式，在生物大分子的反相液相色譜條件下，流動(dòng)相多采用酸性的、低離子強(qiáng)度的水溶液，并加一定比例的能與水互溶的異丙醇、乙腈或甲醇等有機(jī)改性劑，大量使用的填料為孔徑在30納米以上的硅膠烷基鍵合相，除此之外，也有少量高聚物微球。

　　在液相色譜柱的使用中，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)很多實(shí)驗(yàn)室會(huì)面臨C18液相色譜柱頻繁損壞的問題。那么，我們?cè)撊绾晤A(yù)防呢？

　　1、在液相系統(tǒng)中加入在線過濾器

　　在線過濾器的內(nèi)部顆粒空隙一般是0.5微米，對(duì)于UHPLC會(huì)選擇0.2微米空隙的在線過濾器。這個(gè)空隙尺寸和柱頭的過濾篩板尺寸接近或者略小。所以，在線過濾器能夠有效的阻隔來自樣品、泵頭密封墊、自動(dòng)進(jìn)樣器的轉(zhuǎn)子密封墊的顆粒物，以防止柱頭過濾篩板的堵塞。

　　注意：但是對(duì)于非常低死體積的液相系統(tǒng)，在線過濾器的加入可能會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)死體積增大峰展寬變嚴(yán)重的問題。而對(duì)于大多數(shù)的液相系統(tǒng)而言，色譜圖不會(huì)有太大變化。

　　2、在C18液相色譜柱前端使用保護(hù)柱

　　保護(hù)柱有很多種，通用型、一體式、卡套式，但是它其實(shí)是一個(gè)和分析柱固定相相同的10-20mm的小柱子。因?yàn)樗哂泻头治鲋嗤膬?nèi)部填料，所以保護(hù)柱不僅可以阻隔顆粒物，還可以阻隔易吸附的樣品基質(zhì)組分。

　　注意：由于保護(hù)柱中可能有大量的強(qiáng)保留組分，在用強(qiáng)溶劑清洗系統(tǒng)時(shí)請(qǐng)取下保護(hù)柱，以防止這些強(qiáng)保留組分被洗脫進(jìn)分析柱。保護(hù)柱如果出現(xiàn)吸附飽和也可能會(huì)對(duì)分離效果有影響

　　3、對(duì)樣品進(jìn)行凈化處理

　　有一些液相的分析方法沒有明確標(biāo)注樣品的凈化，但我希望大家在使用C18液相色譜柱做分析時(shí)都能夠考慮樣品的凈化，常用的方案是對(duì)樣品進(jìn)行過濾。